Аспергиллёз пчёл

Аспергиллёз, или каменный расплод – заболевание взрослых пчёл и расплода, регистрируемое особенно часто в последние годы на всей территории России и за её пределами.

Основной возбудитель заболевания – гриб Aspergillus flavus Link. Патогенными свойствами могут обладать также A. fumigatus Fres., A. niger van Tiegh. Кроме указанных видов рода Aspergilus, в ульях обнаружены многочисленные виды этого рода, но значение их в патологии пчёл не изучено. Burnside (1930) установил, что A. flavus и A. fumigatus наиболее вирулентны для медоносных пчёл.
Частота заражений и распространение заболевания в естественных условиях зависят от вирулентности гриба, оптимальной температуры (25–45°С), повышенной влажности (95–100%) и резистентности пчёл.

Аспергиллы широко распространены во внешней среде. Естественным резервуаром их являются почва, отмершие растительные остатки на поверхности почвы, обитают они также в качестве сапрофитов на живых растениях, в том числе тычинках цветов и нектарниках. В улей аспергиллы заносятся пчёлами с нектаром и пыльцой, где при наличии предрасполагающих факторов, они развиваются на сотах, в перге, на погибших личинках, куколках и взрослых пчёлах. Наиболее часто болезнь встречается на пасеках, расположенных в затенённых местах, с большим травостоем, когда ульи стоят на низких подставках или сырой почве.
Болезнь возникает преимущественно весной и протекает в виде спорадических случаев в отдельных семьях. Заболевание носит характер токсикомикоза, обусловленного как токсигенными свойствами аспергилл, являющихся продуцентами целого ряда микотоксинов, так и патогенными их свойствами, проявляющимися в способности паразитировать в живом организме личинок и взрослых пчёл.

Процент гибели пчёл в семьях колеблется в зависимости от их силы и условий содержания. Слабые семьи, как правило, быстро погибают.
Заражение личинок происходит через кишечник при употреблении инфицированных спорами гриба нектара, пыльцы. Реже возбудитель проникает в организм через повреждённые различными паразитами наружные покровы. Заболевать личинки и пчёлы могут в любом возрасте. Гибель их наступает через 2–3 дня после заражения.

Болезнь протекает в скрытой и явной форме. При первой  наиболее часто происходит гибель расплода и реже – взрослых пчёл. Погибшие личинки, куколки сморщиваются, твердеют, сегментация их тела исчезает, окраска тускнеет, приобретая желтоватый оттенок. Свежепоражённый расплод покрывается белым мицелием, проросшим из кишечника через кутикулу, который вскоре образует обильное спороношение, при этом личинки выглядят покрытыми налётом жёлтого, желтовато-зелёного, тёмно-зелёного, чёрного или другого цвета, в зависимости от вида аспергилл.

Взрослые пчёлы при поражении вначале возбуждены, активно двигаются, затем слабеют. Брюшко их первоначально становится плотным, а затем твёрдым.

Диагноз устанавливают на основании эпизоотологических данных, клинических признаков заболевания и, главным образом, результатов лабораторного исследования, включающего микроскопическое и микологическое исследования. Учитывая возможные патогенные свойства аспергилл для человека, работу с ними следует проводить с соблюдением мер предосторожности. Для установления диагноза на аспергиллёз проверяют состояние открытого и печатного расплода, осматривают подмор на контрольных листах бумаги и сетчатых поддонах со дна улья. В случае обнаружения мумифицированных личинок проводят микроскопические и микологические исследования, для чего в ближайшую ветеринарную лабораторию направляют кусочки сотов с расплодом на разных стадиях поражения (живые, погибшие, обызвествленные) размером 10×10 см или 20–30 погибших личинок.

Микроскопическое исследование.
При наличии характерного налёта на поверхности тела личинок или пчёл их помещают на чашку Петри и исследуют под микроскопом при малом увеличении (×8, ×10). При этом обнаруживают гифы гриба и органы спороношения, представленные конидиеносцами и конидиальными головками различного цвета в зависимости от вида аспергилл.

Микологическое исследование.
Целью микологического исследования является выделение грибов путём посева на агар Чапека или сусловый агар.
Для предупреждения загрязнения посевов применяемая посуда (чашки Петри, пинцеты, пипетки и др.) должны быть стерильными. Стерилизацию чашек, завёрнутых предварительно в бумагу, а также пинцетов, пипеток и других инструментов проводят в сушильном шкафу при температуре 140–160° в течение 2 часов.

Все процессы, связанные с разливкой питательных сред в чашки Петри, подготовкой патматериала для посева и посев проводят в асептических условиях – у пламени горелки в специальном боксе. Перед посевом проводят контроль заражённости воздуха в боксе спорами грибов седиментационным методом, для чего 1–2 чашки со средами оставляют открытыми в течение трёх минут.
Учитывая возможные патогенные свойства аспергилл для теплокровных, работу с ними следует проводить с соблюдением мер предосторожности.
Стерилизацию бокса, рабочего помещения, термостата проводят парами формальдегида с последующей нейтрализацией аммиаком. На 1 м3 объема помещения расходуют 45 мл 40%-ного раствора формальдегида, к которому добавляют 20 мл воды и 30 г калия перманганата. Дезинфекцию проводят в течение 2 часов, после чего для нейтрализации паров формалина используют раствор аммиака из расчёта 50% от объёма затраченного формалина. Другим способом стерилизации помещения является использование ультрафиолетовых облучателей типа УГД-2, -3 с лампами ДРТ 100, 400, при экспозиции не менее одного часа.
Перед посевом питательный агар расплавляют в водяной бане, а затем после охлаждения до 45-50°С добавляют антибиотики (пенициллина 50 тыс ЕД и стрептомицина 100 тыс ЕД на 1 литр среды) для подавления сопутствующей микрофлоры.

Для выделения гриба либо делают соскобы грибного налёта с поверхности хитинового покрова насекомого и переносят его на поверхность питательной среды, либо трупы насекомых разрезают на кусочки, которые затем переносят на среду.
Для выделения грибов из кишечника поверхность хитинового покрова пчелы обрабатывают 70% спиртом, промывают стерильной водой, после чего с помощью глазного пинцета и ножниц препаруют кишечник и распределяют его по поверхности среды.
Посевы культивируют при температуре 25-30°С. Рост и спороношение большинства аспергилл становится заметным через трое суток.
Принадлежность грибов к роду Aspergillus, а часто и к виду этого рода устанавливают в первичном посеве.

Культурально-морфологические свойства грибов рода Aspergillus.
Мицелий у видов рода Aspergillus бесцветный или светлоокрашенный, цвет колоний определяется массой конидий (спор), развивающихся на конидиеносцах. Конидиеносцы на концах имеют вздутия различной формы.
A. flavus: колонии широко разрастающиеся, зелёные, часто с оттенком жёлтой, лимонной окраски, с возрастом обычно тёмно-жёлто-зелёные; на обратной стороне бесцветные или розовато-тускло-желтоватые. Многие штаммы образуют склероции, хорошо видимые невооружённым глазом в виде шаровидых твёрдых образований, сначала белые, затем коричневые. При микроскопии препаратов конидиеносцы с бесцветной шероховатой оболочкой, образуют на верхушке у молодых культур продолговатые, позже полукруглые или круглые вздутия.
A.fumigatus: колонии широко разрастающиеся, бархатистые, иногда пушисто-войлочные от развития воздушного мицелия, сначала голубовато-зелёные, затем зелёные, с возрастом темнеющие. Обратная сторона колонии бесцветная или окрашена в жёлто-коричневые тона. При микроскопии препарата конидиеносцы гладкие, короткие, часто более или менее зелёные. Головки нерадиальные – в верхней части колбообразного вздутия развиваются одноярусные стеригмы, расположенные не строго параллельно оси конидиеносца, конидии шиповатые, округлые, цепочки их склеены в колонку.
A.niger: колонии быстро растущие, бурые, черновато-коричневые или угольно-чёрные, на обратной стороне бесцветные, или желтоватые, иногда образуют твёрдые белые, с возрастом становящиеся коричневыми, склероции. Конидии иногда гладкие, но чаще шероховатые или шиповатые, коричневые или бурые.

При установлении диагноза проводят лечение больных семей специальными лечебными средствами.
УНИСАН. Лечебную эмульсию препарата готовят путём равномерного перемешивания 1 мл Унисана с 0,5 л (1,5 мл – с 0,75 л) тёплого (35–40°С) водного раствора сахара (1:4). Приготовленным составом опрыскивают соторамки с пчёлами с обеих сторон из мелкодисперсного опрыскивателя при норме расхода 10–12 мл на рамку.
При неблагоприятных погодных условиях препарат скармливают пчёлам с сахарным сиропом из расчёта 1 мл Унисана на 1 л (1,5 мл – на 1,5 л) сахарного сиропа (1:1) при норме расхода 250 мл на семью пчёл. Лечебные обработки повторяют 3–4 раза с интервалом 7 дней до исчезновения признаков заболевания.
АСКОСАН. Рабочую смесь препарата готовят перед использованием из расчёта 5 г аскосана на 500 г сахарной пудры. Приготовленной смесью опудривают пчёл при расходе 5 г на 1 рамку. Лечебные обработки повторяют 3–4 раза с интервалом 6–7 дней до исчезновения клинических признаков заболевания.
АПИАСК. Перед использованием на одном из концов полоски шилом проделывают отверстие на расстоянии около 1 см от её края, через которое продевают металлическую или деревянную шпильку и фиксируют полоску вертикально в центре межрамочного пространства. Препарат используют из расчёта 1 полоска на 5–6 улочек. Лечебные обработки повторяют 3–4 раза с интервалом 6–7 дней или до исчезновения клинических признаков заболевания.

Пчелиные семьи с сильно выраженными клиническими признаками уничтожают, а ульи подвергают дезинфекции. Дезинфекцию парами формальдегида с последующей нейтрализацией аммиаком проводят следующим образом: на дно 12-рамочного улья с соторамками помещают стеклянную ёмкость, куда наливают 45 мл формалина, 20 мл воды и добавляют 30 г калия перманганата. По истечении 2 часов извлекают ёмкость и нейтрализуют пары формалина 5%-ным раствором аммиака.
 

« вернуться назад